流式細胞術在免疫學中有著廣泛的應用，其免疫熒光染色的標本制備非常重要，常常由于標本的制備過程中出現(xiàn)人為非特異性熒光干擾（尤其在間接免疫熒光染色中）或細胞濃度低等檢測結(jié)果。解決這些影響因素的方法如下。

（1）確保標本上機檢測前的濃度為1×10⁶/ml，細胞濃度過低直接影響檢測結(jié)果。

（2）使用蛋白封閉劑，封閉非特異結(jié)合點，尤其在間接免疫熒光標記時必不可少。常用的蛋白封閉劑為0.5%牛血清白蛋白和1%胎牛血清。

（3）熒光抗體染色后充分洗滌，注意混勻和離心速度，減少重疊細胞和細胞碎片。 

（4）設置對照樣品，采用與抗體來源同型匹配的無關對照和熒光抗體的本底對照。

（5）判定結(jié)果時，應注意減去本底熒光，為使免疫熒光的定量分析更準確，應用計算機程序軟件，用擬合曲線方法從實驗組的，曲線峰值中減去對照組的，曲線峰值，可以得到更準確的免疫熒光定量結(jié)果。

（6）注意在冷環(huán)境下操作染色，或加入疊氮鈉，保證細胞免疫熒光定量分析精確和穩(wěn)定。

（7）標本保存，免疫熒光染色后，標本不固定可以在4攝氏度避光情況下保存24小時。時間更長則需要固定保存，常用的固定劑為1%-4%多聚甲醛緩沖液或4%甲醛緩沖液（pH 7.2），固定時間可達到2—3周。

（責任編輯：liushengbao）

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